? ? ?? 來(lái)源：華人抗體
? ? ?? 近年來(lái)，雙特異性抗體基于更為全面藥物機理，顯示更強臨床及市場(chǎng)前面，成為全球抗體藥物的關(guān)注的熱點(diǎn)。目前全球已批準3個(gè)雙特異性抗體藥物（一個(gè)退市），截止到2019年底約有85個(gè)項目處于臨床階段，120個(gè)左右的項目處于臨床前。
? ? ?? 按治療領(lǐng)域分類(lèi)，75%左右的雙抗項目為抗腫瘤藥物，以CD3相關(guān)的雙特異性抗體達到了158個(gè)，占到一半以上。雙抗藥物是眾所周知的開(kāi)發(fā)難度大，而CD3雙抗則是目前臨床階段轉化最為成功的雙抗藥物，甚至直接叫板CAR-T療法。
? ? ?? 2019年6月14日，再生元公布CD3/CD20雙特異性抗體REGN1979一期臨床結果：在14個(gè)患者中，濾泡淋巴瘤FL患者（5mg以上劑量）總響應率ORR為93%，完全緩解率CR為71%；彌漫大B細胞淋巴瘤DLBCL患者(80mg以上劑量）總響應率為57%（4/7），且均為完全緩解，其中2例為經(jīng)CAR-T療法治療失敗的患者。
? ? ?? 2019年12月8日，羅氏在A(yíng)SH會(huì )上公布了2款CD3/CD20雙抗治療復發(fā)或難治B細胞NHL的良好療效，在CAR-T治療無(wú)效的患者中也能夠產(chǎn)生緩解。在曾經(jīng)接受過(guò)CAR-T療法的患者中，ORR為38.9%（n=7/18），CR為22.2%（n=4/18）。
? ? ?? 2019年ASH期間，基于多個(gè)CD3雙抗的顯著(zhù)進(jìn)展，甚至有人提出可以忘記CAR-T藥物研發(fā)的論斷了。然而對于CD3雙抗來(lái)說(shuō)，雖然開(kāi)發(fā)有所突破，但也有難度，仍然在摸索中前線(xiàn)。
CD3雙抗的研究熱點(diǎn)
? ? ?? 目前CD3雙抗的研發(fā)主要集在CD3抗體本身的優(yōu)化，對于其種屬相關(guān)性、親和力和價(jià)鍵方面進(jìn)行了諸多探索，對于與療效和副作用進(jìn)行了充分平衡。
? ? ?? CD3抗體對CD3復合體ε鏈的親和力是BsTCEs是否成功的首個(gè)關(guān)鍵因素，這一點(diǎn)已經(jīng)達成行業(yè)內共識，維持在1-100nM范圍內為最佳。一方面是由于，為了模擬出T細胞的激活作用，CD3抗體需要相對低的親和力，較高的Koff值。因為T(mén)細胞在體細胞的激活過(guò)程中，是依靠于T細胞的反復結合進(jìn)行瀑布效應，形成成簇的T細胞，指數式地帶動(dòng)下游信號通路的變化。如果CD3抗體的親和力過(guò)高，則只會(huì )與T細胞形成1:1的結合，很難引起群體T細胞的殺傷作用。另一方面則與組織分布有關(guān)，過(guò)高親和力的CD3抗體可能將把雙抗限制在脾臟等部位，難以接觸到腫瘤。
▲CD3雙抗藥物機理
? ? ?? CD3單抗的種屬相關(guān)性對CD3雙抗的開(kāi)發(fā)極為關(guān)鍵，SP34是目前為數不多公開(kāi)的可以和猴子具有種屬反應的CD3抗體?；谶@些因素大型藥企及雙抗平臺型企業(yè)均開(kāi)發(fā)了自主的CD3抗體，近年來(lái)閃亮登場(chǎng)的WuXibody就擁有自主知識產(chǎn)權可以和猴子具有種屬反應的CD3抗體。
? ? ?? CD3價(jià)鍵對于雙抗功能也具有重要影響，在研BsTCEs單價(jià)CD3形式多價(jià)形式的。這主要是在之前的實(shí)驗過(guò)程中，發(fā)現多價(jià)形式的CD3雙抗可能會(huì )引起活化誘導T細胞死亡（AICD），造成非靶點(diǎn)依賴(lài)的T細胞激活，在沒(méi)有結合腫瘤相關(guān)抗原情況激活T細胞引起副反應。CD3價(jià)鍵同樣對于CD3抗體親和力息息相關(guān)，對于單價(jià)CD3抗體而言，如上所述通常需要低親和力的CD3抗體。而對于多價(jià)形式，則需要對腫瘤相關(guān)抗原具有高親和力。
CD28為CD3雙抗注入活力
? ? ?? 基于以上對于CD3雙抗的研發(fā)方面，是否能否從其他方面取得突破，賽諾菲首先給出了答案。2019年11月18日，在Nature cancer上的一篇報道，來(lái)自賽諾菲的研發(fā)者們通過(guò)CD3雙抗聯(lián)合CD28的三特異性抗體療法，在抗腫瘤研發(fā)取得突破進(jìn)展。
? ? ?? 在T細胞的激活過(guò)程中，需要TCR/CD3結合到MHC-多肽，同時(shí)需要第二重共刺激信號進(jìn)一步激活。因而在CD3雙抗基礎上，激活CD28有望進(jìn)一步提升抗腫瘤活性。賽諾菲因此傳統CD3雙抗的基礎上加入CD28，形成同時(shí)靶向CD38/CD3/CD28的三特異性抗體。
▲CD28三特異性抗體設計原理
? ? ?? 從功能上來(lái)看，三特異性抗體分工明確。CD38為腫瘤表面抗原，其也可以是其他腫瘤相關(guān)抗原，用于特異性識別識別腫瘤細胞；CD3作為T(mén)細胞共受體，用于激活細胞毒性T細胞和T輔助細胞，并介導T細胞對腫瘤細胞特異性殺傷；CD28分子則是TCR/CD3復合物的共刺激分子，促進(jìn)T細胞活化，且這種增強的T細胞活化驅動(dòng)了T細胞的增殖以及T細胞中抗凋亡蛋白Bcl-xL的表達。
▲基于CODV技術(shù)的三特性抗體
? ? ?? 在具體的分子結構設計上，其一側的N端為靶向腫瘤抗原的Fab，另一側的設計則是通過(guò)CODV（cross-over dual variable ）雙抗技術(shù)平臺同時(shí)靶向CD3/CD28。CODV雙抗平臺技術(shù)最早見(jiàn)于賽諾菲在2016年在mabs上所發(fā)表文章，經(jīng)過(guò)不同的排列組合、篩選和評估，確定通過(guò)4個(gè)linker對VL1/VL2/VH1/VH3以及恒定區進(jìn)行串聯(lián)。該結構能夠形成良好的空間結構，不同靶點(diǎn)之間的識別不會(huì )相互干擾，并且具有較好的穩定性。
? ? ?? 在CD3分子親和力的選擇上，采用了中等親和力的抗體（KD～20nM）平衡了殺傷有效性以及細胞因子大量釋放的安全性問(wèn)題。在Fc的設計上，其采用了IgG4亞型并進(jìn)行了F234A L235A (FALA) 位點(diǎn)突變，進(jìn)一步降低了與FcR的結合功能。
? ? ?? 在體內外試驗，三特異性抗體表現出非常優(yōu)異的腫瘤殺傷效果，并且在CD38低表達的腫瘤細胞上也具有出色效果。更重要的是，還增強了T細胞在體內外殺傷不同骨髓瘤細胞系的能力。
▲CD28三特異性抗體在體外作用
CD28是否會(huì )改變雙抗的格局？
? ? ?? 就在賽諾菲研究工作公布不久后，再生元也嘗試了CD28的三抗應用于卵巢癌抗原MUC16和前列腺癌抗原PSMA，一時(shí)間共刺激CD28三抗似乎有望成為打破CD3雙抗格局的切入點(diǎn)。
? ? ?? CD28三抗能否異軍突起？免疫療法領(lǐng)域的大牛Carl H. June及其同事，在賽諾菲研究的同期的雜志中也進(jìn)行了觀(guān)點(diǎn)點(diǎn)評，他認為整體上利用三特異性抗體來(lái)治療癌癥是一項重要進(jìn)展。作為一種靈活的技術(shù)，三特異性抗體可被用于靶向免疫調節信號的不同組合，使用這類(lèi)抗體抗癌可能比多個(gè)免疫調節單抗的聯(lián)合用藥更安全、更有效。未來(lái)三特異性抗體有望為抗癌免疫治療提供一條新出路。但和CAR-T藥物類(lèi)似，CD28激活后細胞因子釋放綜合征（CRS）帶來(lái)的安全性問(wèn)題仍需關(guān)注。同時(shí)這類(lèi)分子在體內是否會(huì )產(chǎn)生免疫原性，帶來(lái)藥物快速被清除的問(wèn)題也是未來(lái)需要探討的。
? ? ?? 在賽諾菲的研究中，當給猴子靜脈注射三特異性抗體時(shí)，雖然出現了到一定程度的細胞因子相關(guān)毒性，但令人欣慰的是，包含CD28結合域的這一分子并沒(méi)有導致“無(wú)法應付”的CRS。然而需要注意的，猴子中的CD38數量遠遠低于多發(fā)性骨髓瘤人類(lèi)患者，而更多的CD38以及更強的抗體介導的T細胞激活可能會(huì )增加人類(lèi)患者的CRS風(fēng)險。
? ? ?? 確實(shí)，雖然CD28助力CD3雙抗取得一定的突破，但CD28單抗的TGN1412慘案仍然歷歷在目。2005年，歐洲藥品管理局批準TeGenero公司研發(fā)的一款CD28抗體TGN1412進(jìn)入人體臨床試驗。2006年3月13日，TGN1412開(kāi)始首次臨床試驗。六名健康男性志愿者在英國北威克醫院靜脈注射了0.1 mg/kg的藥物。接下來(lái)的幾個(gè)小時(shí)內，全部志愿者都發(fā)生了嚴重的全身性炎癥反應，被送往ICU，其中4名發(fā)生多器官衰竭。副作用來(lái)源于TGN1412誘導的快速和大量的釋放細胞因子。
? ? ?? 看來(lái)關(guān)于CD28三抗的研究爭論仍將持續，而基于聯(lián)合療法的快速興起，雙抗已經(jīng)不能滿(mǎn)足人們的遐想，更廣泛的三抗或者多抗療法或許正在路上了。
? ? ?? 值得注意的是，將于2020年5月3日在波士頓舉行的華人抗體協(xié)會(huì )第四屆年會(huì )中，我們將特別邀請到賽諾菲的首席科學(xué)官Gary J. Nabel 博士作為Keynote speaker,帶來(lái)“Tackling AIDS and Cancer with Novel Antibody Therapeutics”的演講，分享三特異性抗體在艾滋病及癌癥中的應用進(jìn)展，詳細介紹CODV多特異性技術(shù)平臺。
Gary J Nabel?
Gary J. Nabel, M.D., PH.D.
Chief Scientific Officer & Senior VicePresident
Global Research & Development at Sanofi
? ? ?? Dr. Gary J.Nabel M.D., Ph.D. is Chief Scientific Officer, Global Research and Development,and Senior Vice President for Sanofi.? Dr. Nabel also oversees the Breakthrough Laboratory at Sanofi, which developed the first trispecific antibodies now in development for HIV, as well as, cancer immuno-therapies and novel vaccines.?
? ? ?? An author ofmore than 475 scientific publications, Dr. Nabel joined Sanofi in 2012 from the National Institutes of Health, where he served as Director of the Vaccine Research Center (VRC) since 1999, during which time, he provided overall direction and scientific leadership of the basic, clinical, and translational research activities and guided development of novel vaccine strategies against HIV, universal influenza, Ebola and emerging infectious disease viruses. His work encompasses basic mechanisms of HIV gene activation, structure-based vaccine design, and immunotherapy.
? ? ?? Dr. Nabel graduated magna cum laude from Harvard College in 1975 and continued his graduate studies at Harvard, completing his Ph.D. in 1980 and his M.D. degree two years later, followed by a post-doctoral fellowship with David Baltimore at the Whitehead Institute of MIT. In recognition of his expertise at the forefront of virology,immunology, gene therapy, and molecular biology, Dr. Nabel was elected to the National Academy of Medicine in 1998.?? Among his many other honors, Dr. Nabe lreceived the Amgen Scientific Achievement Award from the American Society for Biochemistry and Molecular Biology, the Health and Human Services Secretary’s Award for Distinguished Service, and is a fellow of the American Association of Physicians, and the American Academy of Arts Sciences.
? ? ?? 如涉及知識產(chǎn)權請與我司聯(lián)系
參考文獻
1.CODV-Ig, a universal bispecific tetravalent and multifunctional immunoglobulin format for medical applications；
2.Trispecific antibodies enhance the therapeutic efficacy of tumor-directed T cells through T cell receptor co-stimulation；
3.Trispecific antibodies offer a third way forward for anticancer immunotherapy
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